产品目录

本制品是一款用于快速PCR扩增的2×浓度的即用型预混液，包含改造的Taq DNA Polymerase、强力延伸因子、扩增增强因子、dNTPs Mix、MgCl₂以及优化的缓冲体系，扩增速度可达15sec/kb (1kb以内的极限扩增速度可达5sec/kb)。只需加入模板和引物即可快速高效完成PCR反应，减少操作过程中的污染几率。本品中已预混溴酚蓝染料，PCR反应后可直接进行电泳检测。使用本制品扩增得到的PCR产物3’端具备“A”尾，纯化后可直接进行T载体克隆。

• 使用前，请上下轻轻颠倒混匀，避免产生气泡，防止因混合不均匀造成的反应效果不佳。
  
• 反应液的配制，请在冰上操作完成。因为Taq DNA Polymerase在室温下也具有一定活性，冰上操作可以减少在反应准备阶段发生的非特异性扩增。
  
• 本制品PCR产物不适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 配置反应体系
  建议的模板量：基因组DNA，30～100ng；质粒DNA，0.1～10ng。
  按下列组分配制PCR反应液(反应液配制请在冰上进行)：
  

  成分	用量
  2×快速PCR预混液	25μL
  PCR Forward Primer(10μM)	2.5μL
  PCR Reverse Primer(10μM)	2.5μL
  DNA模板	x μL
  ddH2O	至50μL

  • 2×快速PCR预混液中包含3mM Mg²⁺，适合大部分PCR反应。
• PCR仪程序设置
  将上述配制的反应体系混合均匀后，置于PCR仪中进行反应，具体程序如下：
  

  温度	时间	循环数
  94℃	3～5min	1
  94℃	10sec	30～35
  50～60℃	20sec
  72℃	15～30sec/kb
  72℃	5min	1

  • PCR反应条件(退火温度与延伸时间)在实际操作中需根据模板量、目的片段大小、碱基序列和引物长短等具体情况而设置。
    
  • 退火温度参考引物的理论Tm值，可设置低于引物理论值1～2℃。
    
  • 1kb以内的基因扩增速率可选择5～15sec/kb。